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一種高保真柚皮苷衍生生物墨水加速了軟骨缺損修復(fù)

更新時間：2022-08-25點擊次數(shù)：990


3D生物打印技術(shù)加速了健康科學(xué)研究的發(fā)展，如組織工程與再生醫(yī)學(xué)、藥物篩選和開發(fā)等。生物墨水是3D生物打印技術(shù)的基本組成部分，目前廣泛應(yīng)用的生物墨水主要是由明膠、透明質(zhì)酸、海藻酸鹽、絲素蛋白和PEG等常用生物醫(yī)用高分子衍生物構(gòu)成，其種類和功能有限，需進一步開發(fā)和拓展特異性組織再生的醫(yī)用功能化生物墨水。


由植物和微生物產(chǎn)生的天然化學(xué)物質(zhì)具有廣泛的生物活性和高度的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)，是一種極.具應(yīng)用潛力的醫(yī)療資源。研究發(fā)現(xiàn)天然黃酮糖苷類化合物含有至少一個共軛大π鍵和多個共軛雙鍵，可以在一定波長范圍內(nèi)吸收光，因此推測黃酮糖苷類化合物基生物墨水在光輔助打印過程中或許可以吸收散射光，提高打印產(chǎn)品的形狀保真度。另一方面，黃酮糖苷類化合物具有抗氧化、抗炎和抗凋亡特性，被用于治療骨質(zhì)疏松、風(fēng)濕病和神經(jīng)退行性疾病等臨床前研究。然而，由于其生物利用度低，限制了其在生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。因此，研究黃酮糖苷類化合物衍生物基生物墨水來提高3D生物打印保真度及黃酮糖苷類化合物在組織工程等醫(yī)學(xué)應(yīng)用中的生物利用度是有顯著科學(xué)意義的。與口服黃酮糖苷類藥物相比，3D生物打印黃酮糖苷類化合物基生物墨水可將黃酮糖苷類分子的生物活性直接傳遞至鄰近細胞被有效利用。鑒于其有望改善打印保真度、促進組織再生修復(fù)，將黃酮糖苷類化合物基生物墨水稱為醫(yī)用生物墨水。

為了驗證這一假設(shè)并建立生物活性醫(yī)用生物墨水的研發(fā)方案，湖南大學(xué)劉海蓉教授課題組提出了一種基于柚皮苷衍生物的新型醫(yī)用生物墨水，該生物墨水可顯著提高3D打印保真度，極大地提高了軟骨缺損修復(fù)效率（圖1）。相關(guān)論文在線發(fā)表在《Journal of Materials Chemistry B》，湖南大學(xué)黃宇婷為本文第一作者，劉海蓉、周征為通訊作者，韓曉筱課題組為本文3D生物打印提供了支持。


圖1 一種可提高3D打印保真度的柚皮苷衍生的生物墨水加速了軟骨缺損修復(fù)。



柚皮苷（NAR）衍生的生物墨水材料（NARMA-GELMA bioink）由甲基丙烯酰化柚皮苷（NARMA）和甲基丙烯?；髂z（GELMA）組成，在405 nm光照條件下可快速固化成型。圖2結(jié)果證明了植物源活性因子黃酮糖苷類化合物柚皮苷和天然高分子明膠的甲基丙烯?；男猿晒Γ砻鱊ARMA和GELMA具有光聚合交聯(lián)能力。接著，采用摩方精密nanoArch S140打印機研究載細胞生物墨水的生物打印性能，結(jié)果如圖3所示，相比于經(jīng)典的GELMA生物墨水，光固化打印NARMA-GELMA生物墨水結(jié)果表明該生物墨水的生物打印結(jié)構(gòu)完整性好、形狀保真度高，這一優(yōu)異的光固化結(jié)果得益于NARMA在405 nm處有光吸收特性（圖2B）。并且該打印過程條件溫和，細胞存活狀態(tài)良好。最后采用兔關(guān)節(jié)軟骨缺損模型驗證了NARMA-GELMA生物墨水的軟骨缺損修復(fù)性能，結(jié)果如圖4所示，聯(lián)合自體軟骨細胞的NARMA-GELMA生物墨水修復(fù)兔關(guān)節(jié)軟骨缺損一個月后，NARMA-GELMA水凝膠組處理的組織表面光滑、與宿主組織的界面整合程度高、骨軟骨界面清晰，在組織學(xué)層面上形成了大量的軟骨樣陷窩結(jié)構(gòu)，分泌了豐富的蛋白聚糖和二型膠原成分。特別是，NARMA-GELMA水凝膠組中軟骨細胞呈清晰的梯度排列，與天然軟骨相似。表明NARMA-GELMA生物墨水有利于軟骨樣組織的形成，可提高軟骨修復(fù)效率、能有效促進體內(nèi)關(guān)節(jié)軟骨缺損再生修復(fù)。該研究拓展了生物墨水材料，為特異性組織再生的醫(yī)用功能化生物墨水的研究提供了一種新策略。


圖2 改性柚皮苷和改性明膠的表征。柚皮苷改性前后的FTIR圖(A)、UV-Vis圖(B)和1H NMR譜(C)；明膠改性前后的FTIR圖(D)、UV-Vis圖(E)和1H NMR譜(F)。


圖3 采用摩方精密nanoArch S140打印機制備由柚皮苷衍生生物墨水和改性明膠生物墨水轉(zhuǎn)化的水凝膠結(jié)構(gòu)。(A)3D生物打印的CAD模型和切片圖案；(B)3D生物打印結(jié)構(gòu)的宏觀照片；(C) 3D生物打印結(jié)構(gòu)的活細胞熒光染色圖片。


圖4 生物墨水原位修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損一個月后的大體觀和組織學(xué)染色結(jié)果。(A)大體觀；(B)蘇木素-伊紅染色（H&E）；(C)番紅/固綠染色（SO/FG）；（D）馬松染色（Masson）；（E）二型膠原的免疫組化染色（IHC）；（F）ICRS大體觀評分；（G）O`Driscoll 組織學(xué)評分。